Ako sa vyhnúť bežným nedorozumeniam pri používaní nízko viažucich špičiek pipety?

Tipy na nízku väzobnú pipetu môže významne znížiť zvyšky vzorky v dôsledku ich hydrofóbneho konštrukcie vnútorného povrchu a sú obzvlášť vhodné na manipuláciu s drahými činidlami, viskóznymi kvapalinami alebo stopovými vzorkami (ako sú proteíny a nukleové kyseliny). Ak však nie sú správne prevádzkované, môžu stále ovplyvniť presnosť a opakovateľnosť experimentu. Nasleduje analýza bežných chýb a riešení, ktoré sa používajú v kombinácii s laboratórnymi prevádzkovými špecifikáciami:

Pochopenie 1: Ignorovanie predbežného vyrezávania špičky

Nesprávna prevádzka: Priamo aspiráciu vzorky a vynechajte krok pred opláchnutím.

Náraz: Aj keď špičky pipety s nízkym viazaním môžu znižovať zvyšky, pre vzorky, ako je sérum, bielkoviny alebo organické rozpúšťadlá, ich vnútorné steny môžu stále tvoriť mikro-kvapalinu v dôsledku povrchového napätia, čo vedie k nízkym počiatočným objemom pipetovania.

Správny prístup: Pred formálnym pipetovaním opakujte aspiračnú diskvlanku 2 až 3 krát s rovnakou vzorkou, aby ste vytvorili stabilnú vrstvu tekutého filmu na vnútornej stene špičky (s výnimkou kvapalín s vysokou teplotou/nízkoteplotnými kvapalinami).

Nepochopenie 2: rýchlosť aspirácie je príliš rýchla alebo sa uhol nakloniť

Nesprávna prevádzka: Kvapalinu rýchlo aspirujte alebo je pipetka naklonená viac ako 20 °.
Vplyv:

Pipeta príliš rýchlo: bubliny alebo zadné sanie (tekutina sa ponáhľa do pipety a kontaminuje piest);
Naklonená pipetka: Zmení tlak povrchu kvapaliny, čo vedie k nepresnému objemu pipety a zvýšeného zvyškového objemu. Správny prístup:
Pipa pomaly a pomaly sa uvoľňuje: pracujte s konštantnou rýchlosťou a riadte rýchlosť uvoľňovania piestu;
Držte vertikálne: Udržujte uhol sklonu ≤20 °, keď je špička pipety ponorená do povrchu kvapaliny.
Pochopenie 3: Ignorovanie prevádzkových rozdielov viskóznych tekutín
Nesprávna prevádzka: Použite rovnakú rýchlosť pipetovania ako bežné kvapaliny pre vzorky s vysokou viskozitou (napríklad glycerol a bunkové suspenzie).
Náraz: Viskózne kvapaliny plynú pomaly na vnútornej stene špičky pipety a rýchly výtok spôsobí výrazné zvýšenie zvyškového objemu, čím sa kompenzuje výhody nízkej adsorpčnej konštrukcie.
Správny prístup:

Predĺžte čas ponorenia: zostaňte na povrchu tekutiny po dobu 1 sekundy po jeho aspirácii pred jeho odstránením a pred stlačením druhého prevodového stupňa pri stlačení druhého prevodového stupňa pri stlačení druhého prevodového stupňa sa pozastavte;
Vyberte si špičku pipety so širokým ústami: Na makromolekuly alebo vzorky buniek použite na zníženie šmykovej sily širokopásmosť nízko-adsorpčnej pipetovej špičky (70% väčšia ako štandardná otvor).
Misconception 4: Tvrdé zasiahnutie pri inštalácii tipu
Nesprávna prevádzka: Opakovane zasiahnutie rukoväte pipety, aby ste „utiahli“ špičku.
Účinok: Dlhodobý náraz bude nosiť komponenty tesnenia pipety, zničiť vzduchotesnosť a spôsobiť chybu úniku alebo objemu.
Správna metóda: Pipa vložte zvisle do špičky, jemne stlačte a mierne otočte doľava a doprava, aby sa zmestila.

Misconception 5: Nesprávne ukladanie alebo opätovné použitie
Nesprávna operácia:

Vložte pipetu, keď je na špičke zvyšková tekutina;
Opätovné použitie na jednorazové tipy na nízku adsorpciu, aby ste ušetrili náklady. Vplyv:
Ukladanie plochého príčiny spätného toku tekutiny koroduje pružinu piestov;
Opätovné použitie môže ovplyvniť presnosť v dôsledku krížovej kontaminácie alebo štrukturálnej deformácie. Správna metóda:
Zliknite špičku ihneď po pipetovaní a pipetu zaveste vertikálne;
Opätovné použitie je prísne zakázané, najmä pokiaľ ide o citlivé experimenty, ako sú PCR a izotopy.
Profesionálne rady: Maximalizujte výhody tipov s nízkym recepciou
Zodpovedajte vlastnostiam tekutín:
Prchavé kvapaliny (ako je chloroforma): Vyvarujte sa používania bežných špičiek s nízkym počtom osôb a používajte špičky bezpečne na rozpúšťadlá alebo externé pipety piesty určené pre prchavé činidlá.
Overenie kalibrácie:
Pravidelne vážte hmotnosť čistej vody pipetovanej analytickou rovnováhou (1 ml = 0,9982 g pri 20 ℃), aby ste overili, či skutočný objem spĺňa štandard.
Zhrnutie kľúčových bodov: Tipy s nízkym regenerovaním zlepšujú presnosť znížením straty vzorky, ale ak sa podrobnosti o operácii ignorujú, stále to môže byť kontraproduktívne. Štandardizovaná inštalácia, regulácia rýchlosti, prispôsobenie sa charakteristikám vzorky a prísne jednorazové použitie sú základom pre dosiahnutie experimentov s vysokou opakovateľnosťou.